熒光蛋白知識常見問題解答

1.什么是綠色熒光蛋白?
(green fluorescent protein),簡稱GFP,這種蛋白質(zhì)*早是由下村脩等人在1962年在一種學(xué)名Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn).其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),在藍(lán)色波長范圍的光線激發(fā)下,會發(fā)出綠色螢光.這個(gè)發(fā)光的過程中還需要冷光蛋白質(zhì)Aequorin的幫助,且這個(gè)冷光蛋白質(zhì)與鈣離子(Ca2+)可產(chǎn)生交互作用.由水母Aequorea victoria中發(fā)現(xiàn)的野生型綠色螢光蛋白,395nm和475nm分別是*大和次大的激發(fā)波長,它的發(fā)射波長的峰點(diǎn)是在509nm,在可見光綠光的范圍下是較弱的位置.由海腎(sea pansy)所得的綠色螢光蛋白,僅有在498nm有一個(gè)較高的激發(fā)峰點(diǎn).在細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)領(lǐng)域中,綠色螢光蛋白基因常被用作為一個(gè)報(bào)導(dǎo)基因(reporter gene).一些經(jīng)修飾過的型式可作為生物探針,綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動物(例如:兔子上進(jìn)行表現(xiàn),并拿來映證某種假設(shè)的實(shí)驗(yàn)方法.

2.綠色熒光蛋白發(fā)光原理是什么？
綠色熒光蛋白并不需要與其他物質(zhì)合作,只需要用藍(lán)光照射,就能自己發(fā)光

3.綠色熒光蛋白標(biāo)記技術(shù)有什么意義?
在生物學(xué)研究中,科學(xué)家們常常利用這種能自己發(fā)光的熒光分子來作為生物體的標(biāo)記.將這種熒光分子通過化學(xué)方法掛在其他不可見的分子上,原來不可見的部分就變得可見了.生物學(xué)家一直利用這種標(biāo)記方法,把原本透明的細(xì)胞或細(xì)胞器從黑暗的顯微鏡視場中“揪出來”.傳統(tǒng)的熒光分子在發(fā)光的同時(shí),會產(chǎn)生具有毒性的氧自由基,導(dǎo)致被觀察的細(xì)胞死亡,這叫做“光毒性”,因此,在綠色熒光蛋白發(fā)現(xiàn)以前,科學(xué)家們只能通過熒光標(biāo)記來研究死亡細(xì)胞靜態(tài)結(jié)構(gòu),而綠色熒光蛋白的光毒性非常弱,非常適合用于標(biāo)記活細(xì)胞.

運(yùn)用熒光蛋白可以觀測到細(xì)胞的活動,可以標(biāo)記表達(dá)蛋白,可以進(jìn)行深入的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)等等.特別是在癌癥研究的過程中,由于熒光蛋白的出現(xiàn)使得科學(xué)家們能夠觀測到腫瘤細(xì)胞的具體活動,比如腫瘤細(xì)胞的成長、入侵、轉(zhuǎn)移和新生.

4.紅色熒光蛋白一般用什么緩沖液溶解？
紅色熒光蛋白用什么緩沖液溶解，一般取決于生產(chǎn)廠家的說明書保存制劑，或者使用時(shí)特殊的試劑要求。正常來講紅色熒光蛋白生產(chǎn)后的保存試劑都是PBS（磷酸鹽緩沖液），所以使用時(shí)一般用PBS來溶解。但是如果使用時(shí)有什么特別的要求，也可以使用特殊的緩沖液溶解。但是一般紅色熒光蛋白用都是用磷酸鹽緩沖液來溶解的。

5.什么是紅色螢光蛋白RFP？
紅色熒光蛋白(Red Fluorecent Protein,RFP)基因是從海葵Discoso-masp中分離出的一種新的熒光蛋白基因，其蛋白質(zhì)的*大吸收光譜為583 nm，不需要任何預(yù)處理便可檢測到[。紅色熒光蛋白因其紅熒光較強(qiáng)的組織穿透力，已被廣泛用于動物、植物和酵母等真核細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的報(bào)告基因。

6.紅色熒光蛋白RFP的螢光波長和激發(fā)波長？

熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應(yīng)用：
檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）基因、紅色熒光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動物：小鼠、兔子、猴子等；
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物：細(xì)菌、**、酵母等；
檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達(dá)；

常用熒光蛋白的激發(fā)光源的選型LUYOR-3415RG